nordicmubio FIX＆PERM®細(xì)胞固定和通透試劑盒
在流式細(xì)胞儀中使用抗體對蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物進行細(xì)胞內(nèi)染色，為研究和臨床診斷中的細(xì)胞表型和功能表征提供了多種新選擇。
實際上，某些細(xì)胞類型的明確表型鑒定可能需要同時標(biāo)記細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物。另外，典型膜分子的胞質(zhì)定位可以證明是可靠的譜系標(biāo)志物，例如未分化白血病中的胞質(zhì)CD3和CD22。
在這種情況下，對于許多其他細(xì)胞生物學(xué)和功能研究，必須進行細(xì)胞內(nèi)免疫染色。為此，Nordic-MUbio提供了細(xì)胞固定和通透試劑盒FIX＆PERM®，與流式細(xì)胞術(shù)中細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞染色的其他方法相比，它具有許多優(yōu)勢。
FIX＆PERM®
- 溫和固定細(xì)胞，保留其流式細(xì)胞儀散射特征
- 允許同時表征細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面標(biāo)記
- 快速的技術(shù)–整個過程可以在不到一小時的時間內(nèi)完成，可以立即進行分析或存儲24小時
- 嚴(yán)格的質(zhì)量控制程序–使用定義明確的血液樣本并隨后比較獲得的白細(xì)胞群的散射特征來確定每批樣品的質(zhì)量，從而確保一批又一批的結(jié)果一致且可靠
- 一系列具有優(yōu)化方案的細(xì)胞內(nèi)抗體，可與FIX＆PERM®一起使用
FIX＆PERM®是使用兩種試劑的簡單程序。試劑A輕輕固定細(xì)胞，而試劑B透化細(xì)胞。特定的制劑可降低背景并允許同時添加通透性培養(yǎng)基和熒光染料標(biāo)記的抗體，從而可以對細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞質(zhì)或核酶，癌蛋白，細(xì)胞因子，免疫球蛋白等）進行染色。
程序
對于每個要分析的樣品，在5 ml試管中使用50 µl全血，骨髓或單核細(xì)胞懸浮液 - 加入100 µl試劑A（固定介質(zhì)，室溫下保存和使用）
- 在室溫下孵育15分鐘
- 加入5 ml磷酸鹽緩沖鹽水并以300 g離心5分鐘
- 除去上清液，并向細(xì)胞沉淀中加入100 µl試劑B（通透性培養(yǎng)基）和20 µl適當(dāng)?shù)膯慰寺】贵w偶聯(lián)物
- 低速渦旋1-2秒
- 在室溫下孵育15分鐘
- 如上所述，用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞
- 除去上清液并將細(xì)胞重懸于鞘液中以便立即分析，或?qū)⒓?xì)胞重懸于0.5 ml 1.0％甲醛中，并在黑暗中于2-8°C儲存
- 在24小時內(nèi)分析固定細(xì)胞
為與FIX＆PERM®一起使用而優(yōu)化的產(chǎn)品
大多數(shù)可用的單克隆抗體偶聯(lián)物均可與FIX一起使用。但是，在某些情況下，可能必須優(yōu)化固定步驟。
Nordic-MUbio提供了多種針對FIX＆PERM®而優(yōu)化的小鼠抗人偶聯(lián)（PE / FITC）單克隆抗體。
| Antigen | Clone | Isotype | Format | Quantity | Cat. No. |
| CD3 | UCHT1 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4011 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4012 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4013 |
| CD22 | RFB4 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4051 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4052 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4053 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4111 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4113 |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4191 |
| (MPO-C2) | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4192 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4193 |
| Lysozyme | LZ-2 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4131 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4132 |
| CD68 | Ki-M7 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4152 |
| IL-1 beta | FIB3 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4162 |
| IFN-gamma | GZ4 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4172 |
Furthermore, a number of Combi panels are offered for dual immunostaining protocols.
| Antigen | Clone | Isotype | Format | Quantity | Cat. No. |
| Negative control | Vl-AP | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-201 |
| | Vl-AP | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Lysozyme | LZ-2 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-206 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-212 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-213 |
| CD3 | UCHT1 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-214 |
| CD22 | RFB4 | IgG1 | PE-labeled | |
