BMA的主要專長在于抗體在免疫組織化學和酶免疫測定（ELISAs）中的應用。生產(chǎn)*適用于沒有胎牛血清的培養(yǎng)基。這不僅是對可持續(xù)性和動物福利的重要貢獻，而且產(chǎn)品不含有污染的牛抗體。它們通常僅供體外研究使用，但支持向診斷領域的公司許可適當?shù)漠a(chǎn)品。
BMA S-1007說明書
描述
S100A8 ELISA（鈣粒蛋白A，MRP8）
應用
EIA和ELISA
價錢
瑞士法郎940.00 / 2×96測試
數(shù)量
2 x 96次測試
MRP8（S100A8）
酶免疫分析
用于生物液體中mrp8的特異性測定
測試說明
產(chǎn)品代碼：S-1007
批號：23E1203
僅供體外和研究使用。
不適用于診斷應用。
試劑盒包含：2個預涂、干燥的微量滴定板和執(zhí)行2x96測試的試劑。
到達后冷藏，不要冷凍。
簡介和基本信息
替代名稱：
MRP8:S100A8，鈣粒蛋白A，CP-10（小鼠體內(nèi)）
MRP14:S100A9，鈣粒蛋白B
MRP8/14:鈣保護素，L1，（P8,14），p34
遷移抑制因子相關蛋白（mrp）-8和-14屬于鈣的s-100家族
與骨髓細胞分化相關的結(jié)合蛋白。它們在靜止期中性粒細胞、角質(zhì)形成細胞（尤其是銀屑?。⒔櫺越M織巨噬細胞和活動性炎癥疾病的上皮細胞中高度表達。慢性或急性炎癥中巨噬細胞亞群的異質(zhì)性反映在mrp8和mrp14的不同表達上。表達mrp8和mrp14的吞噬細胞屬于早期浸潤細胞，而mrp8單獨存在于慢性炎癥組織中。mrp8、mrp14和ca2+依賴的mrp8/14雜合物的部分拮抗作用使它們成為多種介質(zhì)。
功能
MRP8/14雜合物的一個主要功能是其抗菌活性（因此被稱為鈣保護素）。mrp8/14通過競爭鋅抑制病原菌的生長。mrp8/14也可誘導某些腫瘤細胞凋亡。這些活性被zn2+和其他二價陽離子所消除，而不是被ca2+或mg2所消除。+
mrp8/14雜合物的另一個重要特性是其作為脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白的*作用。ca2+依賴性脂肪酸-mrp8/14復合物是中性粒細胞中多不飽和脂肪酸的主要載體。復合物在靜息細胞中表達，刺激后移向膜。Zn2+抑制生理性Zn2+血清濃度下MRP8／14的脂肪酸載體容量，從而在血液循環(huán)中不攜帶脂肪酸。
這使得mrp8/14成為鈣信號傳導和花生四烯酸效應之間的重要介質(zhì)。
mrp8（和mrp8/14，但不是單獨的mrp14）在炎癥介質(zhì)刺激下分泌。對中性粒細胞和單核細胞是一種有效的化學引誘劑。然而，mrp8不會增加細胞內(nèi)ca2+，也不會引起氧化爆發(fā)和顆粒酶釋放，如c。
將MRP8暴露于次氯酸鹽（可能由活化的中性粒細胞產(chǎn)生）中，可將其轉(zhuǎn)化為不活潑的二硫鍵二聚體。糖皮質(zhì)激素通過炎癥介質(zhì)上調(diào)mrp8的誘導。MRP8可能有助于調(diào)節(jié)母胎之間的相互作用
解釋為什么滅活小鼠的mrp8基因是胚胎致死的。
mrp14和mrp8在活化巨噬細胞中的共同表達缺乏，說明它們的作用不同。mrp14的c端序列與中性粒細胞固定因子的n端序列相同。mrp14可以磷酸化，從而提高其鈣結(jié)合能力。然后它傾向于
從細胞溶膠轉(zhuǎn)移到細胞膜和細胞骨架。mrp14被證明與具有轉(zhuǎn)移增強能力的中性粒細胞亞群有關。
生物化學
人mrp8分子量為11.0kd，人mrp14分子量為13.3kd，截短12.9kd。ca2+誘導形成（mrp8）（mrp14）（簡稱mrp8/14），（mrp8）2（mrp14）和（mrp8/14）2的雜合物。上面各有兩個EF手圖案
MRP8和MRP14。mrp14對鈣的親和力高于mrp8，而cterminal-ef2的親和力高于n末端ef1。c端結(jié)構(gòu)域也主要決定了二聚反應的特異性。ef2中的螺旋結(jié)構(gòu)在鈣結(jié)合時發(fā)生了很大的構(gòu)象變化，可能是鈣誘導構(gòu)象的一個觸發(fā)因素。
改變。
mrp8/14的抗菌活性是由鋅螯合作用引起的。
mrp14的c端被zn2+逆轉(zhuǎn)。兩個亞單位都沒有顯示出抗菌作用
活性本身，表明鈣誘導的二聚反應導致多組氨酸序列的暴露改變。
ca2+誘導花生四烯酸和多不飽和脂肪酸與mrp8/14的結(jié)合是通過影響鈣依賴性脂肪酸結(jié)合囊的構(gòu)象而被zn2+或cu2+阻止的。大脂肪酸結(jié)合發(fā)生在等摩爾濃度的mrp8和mrp14和
每個EF手的值大于3個鈣離子。
病理學意義
mrp8/14和mrp14通常與急性炎癥相關，mrp8與慢性炎癥相關。與其他疾病標記物相比，mrps的診斷價值和優(yōu)勢在于它們在相應細胞群激活后立即被制備和釋放。其他
標記物可能在下游事件中產(chǎn)生，或者需要在肝臟中從頭合成。
不同條件下，mrp8/14雜合物水平與疾病活動有顯著相關性。然而，mrp8亞單位水平的變化很少受到關注。
-糞便mrp8/14水平預測炎癥性腸病的復發(fā)，并區(qū)分健康對照組、無或低疾病活動性患者和活動性疾病患者。
-血漿mrp8/14水平可能是腎移植急性排斥反應的標志物。
-血清mrp8/14濃度是酒精性肝硬化復發(fā)感染和低生存率的預后指標。
-血清，尤其是滑液中mrp8/14的濃度與類風濕關節(jié)炎的疾病活動密切相關。sle患者血清mrp8/14水平高于健康對照組，與疾病活動、抗dna抗體的存在以及關節(jié)炎的發(fā)生有關。
-mrp8和mrp14可在年齡相關性腦改變和神經(jīng)退行性疾病中檢測到。在腦瘧疾中，小膠質(zhì)細胞的活化和mrp8/14的檢測在整個大腦中廣泛存在。
-mrp8（原稱囊性纖維化（cf）抗原）是cf炎癥的一個指標，在cf患者的肺和血清中有組成性表達，在沒有急性不適或發(fā)熱的患者血漿中有升高。lps在cf中誘導mrp8的作用比正常人明顯。
-mrp8/14存在于尿路結(jié)石和牙石中。齦溝液中mrp8/14水平與其他牙周病標志物有較好的相關性，有助于評價牙周炎癥的程度。
試驗原理
一步非競爭夾心法，過氧化物酶催化試劑限制
四甲基聯(lián)苯胺顯色反應，包括停止反應和在450/630nm處在多點讀板器中讀取。
提供的試劑
S-1007A：準備使用預涂和穩(wěn)定的微量滴定板+板封閉劑（每個2個）。
s-1007b 500ng標準品，重組mrp8的穩(wěn)定凍干制劑。
S-1007D分析緩沖液，3倍濃縮。紅色溶液。
S-1007E四甲基苯甲酰-H2O2溶液。保持在黑暗中。
S-1007F TMB底物緩沖液（檸檬酸鉀）
S-1007R試劑混合物：2.1毫升含有HRPO偶聯(lián)檢測抗體的混合物，
11倍濃縮
該試劑盒至少在冷藏保存的日期前是穩(wěn)定的。
未提供的材料：停止溶液（1N硫酸，見下文）、稀釋用塑料管、清洗用等滲鹽水、移液管、重復移液管、8通道移液管（2）、微孔板清洗機和讀取器（450nm/630nm過濾器）。
開始分析前的準備工作讓所有試劑在開始前預熱到室溫。強烈建議對樣品和標準進行重復測試。準備除TMB以外的所有下列稀釋液
開始分析前的底物溶液
測定緩沖液
用2份蒸餾水稀釋1份封閉濃縮液（S-1007D）以獲得分析緩沖液。例：量取濃縮液15ml，加水30ml。
標準：
用1.0ml試液重建凍干標準品。*渦流幾次，持續(xù)10秒，中間孵育幾分鐘。此500ng/ml標準品現(xiàn)在可以進一步稀釋。如有必要，將本標準中未使用的部分儲存在-20℃以備進一步使用。
稀釋液：-在五個1.5ml聚丙烯管上貼上“25”、“5”、“1”、“0.2”和“0.04”的標簽。
-在“25”管中加入950微升分析緩沖液，在其他四個管中加入400微升分析緩沖液
-向“25”管中加入50微升500ng/ml儲備溶液，進行連續(xù)稀釋。充分混合，將100微升該溶液轉(zhuǎn)移到“5”管中，并通過始終按降序?qū)?00微升轉(zhuǎn)移到下一個管中繼續(xù)進行連續(xù)稀釋。這提供了五個標準解決方案，用于生成具有重復標準的標準曲線。
試劑混合物（工作稀釋）
用10份分析緩沖液稀釋1份封閉的試劑混合物（S-1007R）。示例：如果處理四個含有32個孔的試紙條（每個孔將得到100微升），則將0.32ml試劑混合物添加到3.2ml分析緩沖液中。根據(jù)你的需要調(diào)整這個音量。
樣品：
在-20°C或更低溫度下將樣品分批儲存。盡量避免樣品的凍融循環(huán)，并在適當稀釋的分析緩沖液中稀釋樣品。血清或血漿應按1:5稀釋。
示例：在臺式離心機中旋轉(zhuǎn)樣品5分鐘，然后將100微升添加到400微升分析中
Buffer?；河?:20-1:1000；呼氣、唾液、bal和尿液用1:2。
等滲鹽水：
在1升去離子水或類似質(zhì)量的水中溶解9g NaCl。
TMB基質(zhì)溶液：使用前立即制備。對于整個板，將20毫升基質(zhì)緩沖液（S-1007F）與1毫升基質(zhì)原液（S-1007E）混合。準備后15分鐘內(nèi)使用。
停止解決方案
將硫酸稀釋至1N的濃度。示例：向100ml中添加2.9ml 95-97%的硫酸
水（按此順序）。95-97%濃硫酸（比重1.84）為36N。
溶液宜在開始分析前制備。
試驗程序
1。向每個孔中加入100μl稀釋試劑混合物（見上文）。重復吸管配藥
如果使用多個色譜柱，100微升方便。
2a.向1號柱下井加入100μl的25ng/ml（“25”）至0.04ng/ml（“0.04”）標準溶液。
和2，如下所示。包括兩個空白（如果使用重復的樣本），得到
100μl分析緩沖液。
2b.將100μL適當稀釋的樣品加入相應的孔中。
三。室溫下在潮濕環(huán)境中培養(yǎng)90分鐘。
4。用等滲鹽水清洗盤子3次。用柔軟的吸水紙吸干。
此時稀釋TMB基質(zhì)溶液，準備好停止溶液和8通道移液管
及時停止顏色反應。
5。向每個孔中加入200μL稀釋的TMB基質(zhì)溶液。在室內(nèi)孵育3分鐘
溫度。當MRP8存在時，發(fā)生藍色反應。
6。通過向每口井中加入100μl停止溶液來停止顏色反應。顏色由藍色變?yōu)?br />黃色的。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蝕性，會導致灼傷。
如果與眼睛接觸，立即用大量水沖洗并就醫(yī)。
7。在大約15分鐘內(nèi)，讀取450nm處的吸光度，如有可能，參考設置為630nm。
建議的板設置：
可選擇下列板布置，其中100至0.39為標準稀釋液從100ng/ml到0.39ng/ml，如上所述。SA-1至SA-40為重復樣品。
CONT是指具有已知MRP8含量的對照血清（不包括在試劑盒中）。
計算
方法由復制品形成，樣品中的含量由標準曲線通過微型板計算軟件（如Softmax、分子裝置）或手動計算得出。超出標準范圍的樣品稀釋應使用適當?shù)南♂屢褐貜汀?/span>
局限性和不相容性
不應混合來自不同批次或不同分析的成分。
血清和血漿樣本可以給出可比的結(jié)果。然而，血液樣本需要在提取后立即冷卻，并立即分別處理成血漿或血清。
室溫和孵育時間或多或少影響所有反應。如果某些值偏離刻度（E450nm>3.0），我們建議從每個孔中取出相同體積的溶液（例如100μL），并重新測量板。
結(jié)果的解釋
mrp8/14的循環(huán)水平是一個很好的病理指標。此外，循環(huán)亞單位mrp8和mrp14的水平也可以測量，并可能為疾病的發(fā)病機制提供有趣的線索。mrp亞家族正常范圍的測定
血清或血漿中：
MRP8／14復合物的濃度是炎癥的嚴重程度的指示（值＞100000 ng/ml）已在血清和血漿中測定。c-反應蛋白（crp）和其他炎癥標志物并不總是與mrp8/14相關，因為mrp的水平比crp等急性期蛋白的水平升高更早。
mrp8/14低于正常水平（<100ng/ml）可能提示粒細胞分化障礙。
MRP8濃度升高表示慢性炎癥。研究表明，93%的類風濕關節(jié)炎患者mrp8值升高。然而，mrp8水平在急性炎癥如活化性關節(jié)炎和細菌感染的正常范圍內(nèi)。
急性炎癥，如細菌感染的特征是：
正常MRP8濃度
正常至升高的MRP14濃度
高濃度MRP8／14復合物（＞3000～100000 ng/ml血清）
慢性炎癥，如類風濕性關節(jié)炎的特征是：
高濃度MRP8
高mrp14濃度
略微升高的MRP8/14雜合物濃度。mrp8/14濃度在慢性炎癥的急性期明顯升高。
病毒感染不會導致mrp8/14濃度升高。胰腺炎患者的茜拉沒有顯示MRP8／14血清濃度升高。
糖皮質(zhì)激素免疫抑制治療使mrp8/14雜合物水平恢復到正常范圍
