ChromoTek介紹
德國ChromoTek公司成立于2008年，致力于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究，公司擁有強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，有先進(jìn)的生物制劑，主要主要使命是花費(fèi)較少的時(shí)間和成本，使客戶獲得得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
德國ChromoTek公司 聯(lián)合中國專業(yè)的生物技術(shù)服務(wù)提供商－BioTNT,針對中國市場的實(shí)際情況，推出全世界可靠的GFP 相關(guān)產(chǎn)品。
ChromoTek的產(chǎn)品分類：
一、Nano-Trap系列；以產(chǎn)品結(jié)合物為標(biāo)準(zhǔn)，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結(jié)合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實(shí)驗(yàn)的Chromobodies(質(zhì)?；蚣?xì)胞系形式)；
四、 高品質(zhì)抗體（標(biāo)簽蛋白抗體和普通抗體）；
產(chǎn)品一：
GFP-Trap? —— 值得信賴的科研工具：
Nano-Trap：與agarose beads或者magnetic beads結(jié)合，在免疫沉淀或蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)中，可抓取或純化GFP或RPF融合蛋白。 （優(yōu)點(diǎn)：三好三多）
優(yōu)點(diǎn)一：抗體好---------Nano-Traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（VHHS）；具有分子量小（15Kda）、穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結(jié)合GFP蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點(diǎn)等優(yōu)點(diǎn)；GFP抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不與RFP衍生蛋白結(jié)合。
優(yōu)點(diǎn)二：形式好-------抗體結(jié)合了agarose beads（瓊脂糖珠子）或者magnetic beads（磁珠），在IP實(shí)驗(yàn)，COIP ，pulldown，Chip實(shí)驗(yàn)中可以直接取代特異性GFP 抗體+proteinA/G 瓊脂糖珠子；
優(yōu)點(diǎn)三：效果好------孵化時(shí)間短（只需5-30min），能夠更好與結(jié)合，從細(xì)胞提取物或細(xì)胞器中定量分離GFP融合蛋白及結(jié)合因子
優(yōu)點(diǎn)四：實(shí)驗(yàn)應(yīng)用多：被廣泛用于免疫沉淀、質(zhì)譜分析、酶活測定、生物大分子相互作用/親和力實(shí)驗(yàn)、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）、蛋白質(zhì)相互作用分析；
優(yōu)點(diǎn)五：產(chǎn)品多：有GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品，給您提供更多的科研工具！GFP，RFP，GST Trap作為標(biāo)簽蛋白的特異性純化方法，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap 是用于純化目的蛋白。
優(yōu)點(diǎn)六：樣品類型多：mammalian cells（哺乳細(xì)胞）；tissues/ organisms（組織/器官樣本）；bacteria（細(xì)菌）；yeast （酵母）；plants （植物樣本）
僅需六個(gè)步驟，30min 僅需6個(gè)步驟，30min 實(shí)驗(yàn)，Chromotek GFP-Trap?_A的5大實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：
→→ →收集細(xì)胞 細(xì)胞裂解 平衡beads 結(jié)合蛋白 ,加入裂解的細(xì)胞 → 清洗beads → 洗脫蛋白
| 免疫沉淀 | 酶活測定 | Co-IP | Pull down | ChIP |
后期實(shí)驗(yàn) | Western blot | 酶活測定 | 沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用SDS-Page 跑膠，western blot鑒定預(yù)測作用蛋白Y，或樣品利用質(zhì)譜后續(xù)分析。 | 洗脫的復(fù)合物；同時(shí)進(jìn)行GFP和第二標(biāo)簽的western blot 實(shí)驗(yàn)。 | 交聯(lián)反應(yīng)逆轉(zhuǎn)，DNA純化，DNA鑒定（如用QPCR 或者chip實(shí)驗(yàn)），同普通CHIP 實(shí)驗(yàn) |
nano trap替代的產(chǎn)品 | GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GST 標(biāo)簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠 | GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 |
目的 | 弱GFP蛋白樣品的富集；或后期實(shí)驗(yàn) | 可以用beads直接測定酶活 | 蛋白-蛋白相互作用，一般驗(yàn)證體內(nèi)的蛋白互作 | 蛋白-蛋白相互作用，一般驗(yàn)證體外的蛋白互作 | 蛋白-DNA相互作用 |
（1）實(shí)驗(yàn)不同，裂解的細(xì)胞不同；pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二標(biāo)簽融合蛋白的裂解物；chip實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞固定步驟，染色質(zhì)斷裂步驟；
實(shí)驗(yàn)不同，加入的裂解物不同；chip實(shí)驗(yàn)加入的為斷裂的DNA-蛋白復(fù)合物；
（2） GFP-Trap 用于IP 實(shí)驗(yàn)（Immunoprecipitation）（免疫沉淀）和Co-IP 實(shí)驗(yàn)（免疫共沉淀） ：
Co-IP 實(shí)驗(yàn)（Co-Immunoprecipitation）（免疫共沉淀）原理圖
| 傳統(tǒng)IP | GFP-Trap用于IP | 傳統(tǒng)Co-IP | GFP-Trap用于Co-IP |
| A | B | C | D |
實(shí)驗(yàn)原理 | 抗體與細(xì)胞裂解液或上清中相應(yīng)蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agarose珠子孵育，得到蛋白復(fù)合物，洗脫蛋白。 | 細(xì)胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白與GFP-Trap孵育，得到蛋白復(fù)合物，洗脫蛋白。 | 細(xì)胞非變性條件下裂解，完整胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。結(jié)合的實(shí)驗(yàn)原理同A/B | |
目的 | 得到純化的蛋白或進(jìn)行后期實(shí)驗(yàn) | 同A | 研究蛋白質(zhì)相互作用 | |
后期實(shí)驗(yàn) | 洗脫的蛋白采用SDS-Page 跑膠，采用GFP 抗體western blot進(jìn)行鑒定。 | 沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用SDS-Page 跑膠，western blot 鑒定，也可利用質(zhì)譜進(jìn)行后續(xù)分析。 | ||
時(shí)間 | 長，超過一天 | 短，30min | 同A | 同B |
步驟 | 多，超過20個(gè)步驟 | 少，僅需6個(gè)步驟 | 同A | 同B |
特異性 | 普通抗體特異性不高 | 羊駝抗體，特異性高 | 同A | 同B |
使用產(chǎn)品 | 可選用特異性抗體 或GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠 | GFP抗體-瓊脂糖珠子，RFP-Trap，GST-Trap，Dnmt1-Trap | 同A | 同B |
適用性 | 通用方法，適合面寬 | 有GFP，RFP，GST，Dnmt1-Trap等4個(gè)品種的標(biāo)簽蛋白Trap 可選 | 同A | 同B |
產(chǎn)物 | 純度不高 | 純度高，對比見下左圖 |
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Nano-Traps主要產(chǎn)品見表：
| 品牌 | 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
GFP-Trap? | Chromo tek | gta-10 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | gta-20 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | gta-100 | GFP-Trap?, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | gta-200 | GFP-Trap? coupled to agarose | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | gta-400 | GFP-Trap? coupled to agarose | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | gtak-20 | GFP-Trap? coupled to agarose kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | gtm-20 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | gtm-100 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | gtm-200 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 200 rxns | 5360 | |
Chromo tek | gtp-96 | GFP-multiTrap?, black 96 well plate | 1 pc | 4100 | |
Chromo tek | gtp-96 | GFP-multiTrap?, black 96 well plate | 5 pc | 15600 | |
Chromo tek | gtm-400 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | gtmk-20 | GFP-Trap? coupled to magnetic beads kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | gt-250 | GFP-Trap? free protein | 250 μg | 4500 | |
RFP-Trap? | Chromo tek | rta 10 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 10rxns | 2000 |
Chromo tek | rta 20 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 20rxns | 6700 | |
Chromo tek | rta 100 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | rta200 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 200rxns | 5360 | |
Chromo tek | rta 400 | RFP-Trap?, coupled to agarose | 400rxns | 84330 | |
Chromo tek | rtak-20 | RFP-Trap?, coupled to agarose, | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | rt-250 | RFP-Trap?, free protein | 250 μg | 4500 | |
GST-Trap | Chromo tek | stm-10 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | stm-20 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | stm-100 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | stm-200 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | stm-400 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | stmk-20 | GST-Trap?, coupled to magnetic beads, kit | 20 rxns | 8400 | |
Chromo tek | st-250 | GST-Trap?, free protein | 250 μg | 4500 | |
Dnmt1-Trap | Chromo tek | dta-10 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 10 rxns | 2000 |
Chromo tek | dta-20 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 20 rxns | 6700 | |
Chromo tek | dta-100 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 100 rxns | 27090 | |
Chromo tek | dta-200 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 200 rxns | 48240 | |
Chromo tek | dta-400 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose | 400 rxns | 84330 | |
Chromo tek | dtak-20 | Dnmt1-Trap, coupled to agarose, kit | 20rxns | 8400 | |
Chromo tek | dt-250 | Dnmt1-Trap,freeprotein | 250μg | 4500 | |
Binding Controls | Chromo tek | bab-20 | Blocked agarose beads (binding control) | 500 μl (20 rxns) | 1500 |
Chromo tek | bmp-20 | Blocked magnetic particles ( binding control) | 500 μ l ( 20 rxns) | 1500 |
產(chǎn)品二：
Nano-booster是利用Atto公司的熒光素共價(jià)結(jié)合到特異性GFP抗體上；當(dāng)GFP 融合蛋白信號比較弱的時(shí)候，或者熒光蛋白變性后，具有再激活的作用。
在研究活細(xì)胞中蛋白定位和動力學(xué)的過程中是不是會有如下的困惑：
1.固定樣品中細(xì)胞表達(dá)的熒光融合蛋白信號強(qiáng)度在生理表達(dá)水平通常很低？
2.熒光蛋白的耐光性和量子效率達(dá)不到超分辨顯微鏡的要求（如：3D-SIM, STED或 STORM/ PALM）？
3.許多細(xì)胞生物學(xué)方法如Hcl處理的BrdU檢測，EdU-Click-It處理或者熱變性的熒光原位雜交（FISH）會干擾熒光融合蛋白信號的檢測，需要重新激活GFP 信號？
優(yōu)點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)一：抗體好---------Nano-Boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（VHHS）；具有分子量?。?5Kda）、穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結(jié)合GFP蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點(diǎn)等優(yōu)點(diǎn)；GFP抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不與RFP衍生蛋白結(jié)合。
優(yōu)點(diǎn)二：Atto公司的熒光素，具有增強(qiáng)熒光的作用；
優(yōu)點(diǎn)三：作用效果好：
1、作為熒光增強(qiáng)劑使用；
2、對變性熒光蛋白具有再激活作用；
3、不僅能夠增強(qiáng)信號，還能夠增加熒光蛋白熒光穩(wěn)定性。
優(yōu)點(diǎn)四：產(chǎn)品多：不僅有GFP booster，還有RFP booster；
Nano Booster 產(chǎn)品應(yīng)用：
1、產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)方法：免疫熒光（IF）,免疫組化（IHC）；
2、產(chǎn)品使用材料：細(xì)胞系，組織切片；
3、產(chǎn)品應(yīng)用方向：熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，超分辨率顯微鏡（3D-SIM，PALM, STED,STORM）；
實(shí)驗(yàn)結(jié)果改進(jìn)示例：
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：
上圖：比較 HeLa 細(xì)胞系核表達(dá)的GFP-融合蛋白，GFP 信號增強(qiáng)（G FP-Booster_Atto488使用前和使用后）由用戶確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
EdU-Click-iT? 處理會導(dǎo)致GFP 信號的毀壞。 GFP-Booster標(biāo)記了GFP 融合蛋白，因此有激活和加強(qiáng)熒光信號的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。下圖：GFP-Dnmt1 融合蛋白，三色熒光檢測，同時(shí)檢測 紅色：5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信號；綠色，結(jié)合了GFP Booster 信號；藍(lán)色，DAPI 信號（在EdU-Click-iT? 處理后GFP Booster）
Nano-booster主要產(chǎn)品見下表：
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| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
GFP-Booster | Chromo tek | gba488-TS | GFP-Booster_atto488-TS | 50 μg | 2500 |
Chromo tek | gba488 | GFP-Booster_atto488 | 100 μg | 5400 | |
Chromo tek | gba-647N | GFP-Booster-Atto 647N | 100 μg | 詢價(jià) | |
Chromo tek | gbdl-650-TS | GFP-Booster- Atto 647N | 50 μg | 詢價(jià) | |
Chromo tek | gba-594 | GFP-Booster-Atto 594 | 100 μg | 詢價(jià) | |
RFP-Booster | Chromo tek | rba594-TS | RFP Booster atto594 TS | 50u g | 2500 |
Chromo tek | rba594 | RFP-Booster_atto594 | 100 μg | 5400 | |
Chromo tek | rbdl-650-TS | RFP-Booster- Atto 650ts | 50 μg | 詢價(jià) | |
Chromo tek | rba-700 | RFP-Booster-Atto 700 | 100 μg | 詢價(jià) | |
Chromo tek | rba-488 | RFP-Booster-Atto 488 | 100 μg | 詢價(jià) |
備注：Invtrogen新推出的Click-iT? EdU檢測也是以檢測新合成DNA中摻入的核苷類似物為基礎(chǔ)，但該方法所采用的核苷類似物是EdU，而且不是通過抗體檢測，而是基于一個(gè)click反應(yīng) --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價(jià)反應(yīng)。Click-iT檢測避免了BrdU檢測所需的苛刻處理?xiàng)l件，可避免DNA變性，維持樣本的形態(tài)，因而提供了一種更可靠且更簡單的方法進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。
DAPI，是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料，常用與熒光顯微鏡觀測。因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜，它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當(dāng)DAPI與雙股DNA結(jié)合時(shí)，大吸收波長為358nm，大發(fā)射波長為461nm，其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。 所以不會影響綠色熒光蛋白的觀測。
產(chǎn)品三：Chromobodies
ChromoTek公司的Chromobodies?是一種新的極其微小的細(xì)胞內(nèi)功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結(jié)合域結(jié)構(gòu)(VHH)。和普通抗體不同的是，這些創(chuàng)新的熒光納米探針可以使活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和進(jìn)程實(shí)時(shí)分析和可視化。因此，Chromobodies? 是做研究細(xì)胞內(nèi)研究包含高含量分析（HCA）的一種新的理想試劑。
除了穩(wěn)定細(xì)胞株，你也可以得到Chromobody?質(zhì)粒，它允許你創(chuàng)建自己的細(xì)胞系或瞬時(shí)表達(dá)Chromobody?。
所有Chromobody?結(jié)合域都是經(jīng)過精心挑選，以不干擾內(nèi)源性蛋白質(zhì)的功能，并提供了*的機(jī)會來標(biāo)記活細(xì)胞中天然蛋白。
產(chǎn)品形式：質(zhì)?；蛘呒?xì)胞系產(chǎn)品。
Chromobodies系列產(chǎn)品見下表：
Actin Chromobody
貨號 | Chromo tek | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
dcg | Chromo tek | Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP | 20μg | 14900 |
dcr | Chromo tek | Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP | 20μg | 14900 |
ccg | Chromo tek | Cell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP | 20 μg | 14900 |
ccr | Chromo tek | Cell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP | 20 μg | 14900 |
lcg | Chromo tek | Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP | 20 μg | 14900 |
lcr | Chromo tek | Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP | 20 μg | 14900 |
acg | Chromo tek | Actin Chromobody? plasmid, αActin-GFP | 20 μg | 14900 |
acr | Chromo tek | Actin Chromobody? plasmid, αActin-RFP | 20 μg | 14900 |
產(chǎn)品系列四：
ChromoTek推出一系列高質(zhì)量常見抗體見下表：
熒光標(biāo)簽抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
3f5 | Chromo tek | RFP antibody mouse monoclonal | 100 μg | 3900 |
5f8 | Chromo tek | RFP antibody rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
3h9 | Chromo tek | GFP antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
標(biāo)簽抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
6g9 | Chromo tek | GST antibody, rat monoclonal | 100 μ l | 3900 |
6f7 | Chromo tek | FLAG antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
9E1 | Chromo tek | c-Myc antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
7c9 | Chromo tek | HA antibody, rat monoclonal | 100 μg | 3900 |
目的蛋白抗體
貨號 | 品牌 | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
2e8 | Chromo tek | Dnmt1antibody,ratmonoclonal | 500μl | 4900 |
2e8ts | Chromo tek | Dnmt1antibody,ratmonoclonal | 125μl | 2000 |
16d10 | Chromo tek | PCNA antibody rat monoclonal | 100 μg | 4900 |
16d10ts | Chromo tek | PCNA antibody rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
4b8 | Chromo tek | Ago1 antibody, rat monoclonal | 100 μg | 5400 |
4b8ts | Chromo tek | Ago1 antibody, rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
11a9 | Chromo tek | Ago2 antibody, rat monoclonal | 100 μg | 5400 |
11a9ts | Chromo tek | Ago2 antibody, rat monoclonal | 25 μg | 2000 |
1c7 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD | 5 ml | 5400 |
1c7ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD | 1 ml | 2000 |
3d12 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1 | 5 ml | 5400 |
3d12ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1 | 1 ml | 2000 |
3e10 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 2 | 5 ml | 5400 |
3e10ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 2 | 1 ml | 2000 |
6d7 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4 | 5 ml | 5400 |
6d7ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4 | 1 ml | 2000 |
3e8 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 5 | 5 ml | 5400 |
3e8ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 5 | 1 ml | 2000 |
4e12 | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 7 | 5 ml | 5400 |
4e12ts | Chromo tek | RNA Pol II CTD, phos. Serine 7 | 1 ml | 2000 |
