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          neb P0704S說明書

           更新時(shí)間:2019-02-18 點(diǎn)擊量:3003

          neb P0704S說明書

          PNGase F.

          目錄 #

           

           P0704S

          • 濃度

             500,000單位/毫升

            尺寸

          •   P0704L  75,000個(gè)單位

            價(jià)格表

            $ 718.00

          PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶,其在高甘露糖,雜合和復(fù)合寡糖的內(nèi)部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。

          • 通過SDS-PAGE和完整的ESI-MS測(cè)定,純度≥95%
          • 非重組,沒有可檢測(cè)的內(nèi)切糖苷酶F1,F(xiàn)2或F3污染
          • 儲(chǔ)存在50%甘油中; 宜活動(dòng)和穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月
          • 可在天然或變性條件下使用
          • 優(yōu)化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整,適合進(jìn)一步分析

           

           

           

           

           
           

          肽 - N-糖苷酶F,也稱為PNGase F,是一種酰胺酶,可裂解來自N-連接糖蛋白的高甘露糖,雜合寡糖和復(fù)合寡糖的內(nèi)層GlcNAc和天冬酰胺殘基(1)

          詳細(xì)的特異性: 詳細(xì)的特異性:

          當(dāng)內(nèi)部的GlcNAc殘基與α1-3巖藻糖殘基連接時(shí),PNGase F不能從糖蛋白切割N-連接的聚糖。這種修飾常見于植物和一些昆蟲糖蛋白中。

          產(chǎn)品來源

          PNGase F從腦膜炎黃桿菌Flavobacterium meningosepticum)(3)中純化,不含蛋白酶和Endo F活性。

          提供的試劑

          本產(chǎn)品隨附以下試劑:

           存儲(chǔ)在(°C)濃度
          糖蛋白變性緩沖液-2010 X.
          NP-40-2010%
          GlycoBuffer 2-2010 X.

           

          應(yīng)用功能

          • 糖蛋白分析
          • 從糖蛋白中去除高甘露糖,雜合和復(fù)雜的  N-聚糖
          • 無污染物(Endo F,蛋白酶等)

           

          單位定義

          一個(gè)單位定義為在37℃下在10μl的總反應(yīng)體積中在1小時(shí)內(nèi)從10μg變性的RNase B中除去> 95%的碳水化合物所需的酶量。

          單位定義測(cè)定:
          將10μgRNaseB用1X糖蛋白變性緩沖液(0.5%SDS,40mM DTT)在100℃變性10分鐘。加入NP-40和GlycoBuffer 2后,加入兩倍稀釋的PNGase F,將反應(yīng)混合物在37℃下溫育1小時(shí)。通過SDS-PAGE顯現(xiàn)反應(yīng)產(chǎn)物的分離。

          1X糖蛋白變性緩沖液
          0.5%SDS 
          40 mM DTT 

          1X NP-40
          1%NP-40,MilliQ-H 2 O

          反應(yīng)條件

          1X GlycoBuffer 2 
          在37°C孵育

          1X GlycoBuffer 2 
          50 mM磷酸鈉
          (pH值@ 25°C)

           

          貯存溫度

          -20℃下

          儲(chǔ)藏條件

          在 25℃下,20mM Tris-HCl 
          50mM NaCl 
          5mM EDTA 
          50%甘油
          pH 7.5

          熱滅活

          75°C,10分鐘

          分子量

          表觀:36000道爾頓

          1. 由于SDS抑制PNGase F活性,因此必須使NP-40存在于反應(yīng)混合物中。為什么這種非離子型去污劑抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
          2. 為了使天然糖蛋白去糖基化,可能需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間以及更多的酶。
          3. PNGase F不會(huì)切割  含有核心α1-3巖藻糖的N-連接聚糖。
          4. 典型反應(yīng)條件:請(qǐng)參閱協(xié)議

           

           

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